Technologia tła
Cagrilintyd jest nowym, długo działającym acylowanym analogiem amyliny. Jako nieselektywny agonista receptora amyliny (AMYR) i receptora sprzężonego z białkiem kalcytoniny G (CTR), jest cyklicznym polipeptydem złożonym z 38 aminokwasów. Jego sekwencja zawiera 38 aminokwasów i parę wiązań dwusiarczkowych. Cagrilintyd może znacznie zmniejszyć masę ciała i spożycie pokarmu i ma potencjał w badaniach nad otyłością. Amylina to kolejny hormon związany z głodem i sytością, znajdujący się poza szlakiem sygnałowym GLP-1.
Cagrilintyd może zmniejszać spożycie energii, regulować wybory i preferencje żywieniowe, wywierać działanie regulujące poziom glukozy poprzez współwydzielanie z insuliną, hamować poposiłkowe uwalnianie glukagonu i opóźniać opróżnianie żołądka. Ma oczywiste zalety w leczeniu cukrzycy, otyłości, zespołu metabolicznego, chorób układu krążenia i innych aspektów, a także ma szerokie perspektywy popytu i zastosowania.
Chemiczny wzór strukturalny cagrilintydu
Podstawowe informacje
angielskiNja：Cagrilintyd
Numer firmy：GT-F064
CAS：1415456-99-3
Ssekwencja：γ-Glu-Lys-Cys-Asn-Thr-Ala-Thr-Cys-Ala-Thr-Gln-Arg-Leu-Ala-Glu-Phe-Leu-Arg-His-Ser-Ser-Asn-As n-Phe-Gly-Pro-Ile-Leu-Pro-Pro-Thr-Asn-Val-Gly-Ser-Asn-Thr-Pro-NH2(mostek dwusiarczkowy:cys4-cys9)
MolekularnyFormuła：C194H312N54O59S2
MolekularnyWaga：4409.01
Surowce użyte doCagrilintyd
Trasa syntetyczna
Schemat przygotowania cagrilintydu
(1)PrzygotowanieCagrilintydŻywica peptydowa
Weź 1,5 mmol pierwszego zabezpieczonego aminokwasu i 1,5 mmol HOBT, rozpuść w odpowiedniej ilości DMF i schłódź do 0~15°C; pobrać kolejne 1,5 mmol DIC, powoli dodać je do roztworu zabezpieczonego aminokwasu w DMF, mieszając, i mieszać mieszaninę reakcyjną przez 10 minut w temperaturze 0 ~ 15°C w celu otrzymania aktywowanego roztworu zabezpieczonego aminokwasu, który odstawia się.
Pobrać 0,5 mmol żywicy aminowej (stopień podstawienia 0,42 mmol/g), spęcznić roztworem DMF przez 60 minut, odbezpieczyć 20% roztworem Pip/DMF przez 30 min, przemyć i przesączyć w celu uzyskania żywicy, która ma zostać przereagowana.
Dodaj aktywowany roztwór pierwszego zabezpieczonego aminokwasu do żywicy, która ma zostać poddana reakcji, przeprowadź reakcję sprzęgania w temperaturze 25 ~ 35 ℃ przez 120 ~ 300 minut, przefiltruj i przemyj, aby uzyskać żywicę zawierającą 1 chroniony aminokwas: Fmoc-Pro-Resin
Stosując tę samą metodę jak powyżej, uzyskaj sekwencyjny dostęp do odpowiednich chronionych aminokwasów lub fragmentów wspomnianych powyżej od 2. do 38.:Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Gly-OH，Fmoc-Val-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Ile-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Phe-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-Ser(tBu)-OH，Fmoc-His(Trt)-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Pro-OH·H2O，Fmoc-Glu(OtBu)-OH，Fmoc-Ala-OH·H2O，Fmoc-Leu-OH，Fmoc-Arg(Pbf)-OH，Fmoc-Gln(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Ala-Thr(psi(Me,Me)pro)-OH，Fmoc-Thr(tBu)-OH，Fmoc-Asn(Trt)-OH，Fmoc-Cys(Trt)-OH，Fmoc-Lys(Boc)-OH，Fmoc-Glu-OtBu，Eikozanodionian mono-tert-butylu, otrzymując 4,98 g żywicy peptydowej karmegliptyny
(2)Przygotowanie ropyCagrilintyd peptyd liniowy
Weź 4,49 g żywicy peptydowej karfilzomibu, dodaj zmieszany roztwór TFA, stosunek zmieszanego roztworu wynosi TFA:EDT/Tis/fenol/H₂O = 87,5:2,5:5:2,5:2,5, a dawka wynosi 8 ml na gram żywicy; mieszać mieszaninę reakcyjną w temperaturze 20~30°C przez 3 godziny, przefiltrować mieszaninę reakcyjną za pomocą lejka z piaskiem, zebrać przesącz, przemyć żywicę 3 razy małą ilością TFA, połączyć przesącze, dodać MTBE w celu wytrącenia, przemyć osad MTBE 3 razy i wysuszyć pompą, aby otrzymać białawy proszek, który stanowi 2,08 g surowego liniowego peptydu karfilzomibu.
(3)Wytwarzanie surowego roztworu cyklicznego peptydu Cagrilintyd
Weź 0,50 g surowego liniowegoCpeptydu agrilintydu, przygotować surowy liniowy roztwór peptydu o stężeniu 5,0 mg/ml, dodać kroplami 5 ml roztworu DMSO, mieszając, i reagować w temperaturze 20 ~ 30°C przez 20 godzin, aby otrzymać surowy roztwór cyklicznego peptydu kagrilintydu.
(4)Przygotowanie rafinowaneCpeptyd agrilintydu
Weź ropęCroztwór cyklicznego peptydu arraglitide i przefiltrować go za pomocą mieszanej mikroporowatej membrany filtracyjnej o średnicy porów 0,45 µm；
Oczyścić i przygotować przy użyciu wysokosprawnej chromatografii cieczowej i zebraćCfrakcje arragliptyny；
Do wymiany buforu zastosowano wysokosprawną chromatografię cieczową. Zebrano główny pik po wymianie buforu i oznaczono jego czystość metodą analitycznej chromatografii cieczowej. Roztwory głównego piku po wymianie buforu połączono, zatężono pod zmniejszonym ciśnieniem, uzyskując wodny roztwór karbotydu w kwasie octowym, który liofilizowano, otrzymując 152,18 mg rafinowanego karbotydu o czystości 99,58%, maksymalnej zawartości pojedynczego zanieczyszczenia 0,09%, całkowitej wydajności 31,87% i masie cząsteczkowej 4409,0
HPLC diagram
Schemat MS
Powyższe przykłady pokazują, że w porównaniu z procesem syntezy sprzęgania krok po kroku, produkt otrzymany sposobem dostarczonym przez niniejszy wynalazek ma czystość większą niż 99,0%, a każde pojedyncze zanieczyszczenie jest mniejsze niż 0,1%, co poprawia jakość produktu i całkowitą wydajność. Proces jest prosty i łatwy do kontrolowania, charakteryzuje się wysokim stopniem uprzemysłowienia oraz ma szeroką wartość praktyczną i perspektywy zastosowania.
Skontaktuj się z nami
Telefon: +86-18986204913
Tel: +86-027-83338163
E-mail: info@cosperpharma.com
