Przegląd i wytwarzanie octanu ikatybantu

Przegląd

Ikatybant octan to specyficzny dla choroby lek na naczyniaki hemangioidalne (HAE) opracowany przez firmę Shire i zatwierdzony przez FDA w dniu 25 sierpnia 2011 r. do leczenia ostrych epizodów dziedzicznego obrzęku naczynioruchowego u dorosłych w wieku 18 lat i starszych. Jest to także trzeci lek zatwierdzony przez FDA do leczenia ataków HAE. Octan ikatybantu ma strukturę podobną do d-dekapeptydu podobnego do bradykininy, ale zawiera pięć aminokwasów niepochodzących z białka. Działa jako silny, selektywny, konkurencyjny antagonista receptorów bradykininy typu 2 (B2), łagodząc miejscowy obrzęk, stan zapalny i ból związany z epizodami HAE poprzez hamowanie działania bradykininy. HAE stanowi tylko jedno z kilku potencjalnych wskazań, w przypadku których ikatybant może być wskazany; inne potencjalne zastosowania obejmują astmę, marskość wątroby i inne rodzaje obrzęku naczynioruchowego. W związku z tym octan ikatybantu wykazuje znaczną wartość terapeutyczną i szerokie perspektywy rynkowe.

Wzór struktury chemicznejOctan ikatybantu

EistotneIinformacja

Nazwa chińska:醋酸艾替班特

Nazwa angielska: Octan ikatybantu

Identyfikator firmy：GT-F005

CAS：138614-30-9；130308-48-4

Snumer seryjny：H-D-Arg-Arg-Pro-Hyp-Gly-Thi-Ser-D-Tic-Oic-Arg-OH   

Mformuła molekularna：C59H89N19O13S

Mmasa cząsteczkowa：1304.52

Octan ikatybantu Widmo MS

Trasa syntetyczna

1: Przygotowanie żywicy Fmoc-Arg(Pbf)-CTC

Dodać 11,1 g żywicy chlorku 2-chlorotrifenylometylu z szybkością podstawienia 0,9 mmol/g do kolumny reakcyjnej w fazie stałej, a następnie dodać żywicę spęcznioną DMF na 30 minut. Dodaj 3,50μl DIPEA do 12,98 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH i aktywować przez 5 minut; następnie dodać żywicę spęcznioną DMF i pozostawić mieszaninę do osiągnięcia równowagi po 10 minutach. Dodaj kolejne 3,50μl DIPEA, reagować w temperaturze pokojowej przez 45 minut i na koniec uszczelnić metanolem przez 20 minut. Odparować mieszaninę reakcyjną, przemyć trzy razy DMF, trzy razy DCM, a następnie skurczyć trzykrotnie metanolem odpowiednio przez 3 minuty, 5 minut i 8 minut, otrzymując żywicę Fmoc-Arg(Pbf)-CTC o zmierzonej szybkości podstawienia 0,5 mmol/g.

2：Sprzęganie z Fmoc-Oic-OH

Odważyć 10 mmol żywicy Fmoc-Arg (Pbf)-CTC i dodać do reaktora w fazie stałej, spęczniać w DMF przez 0,5 h, następnie dwukrotnie usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK odpowiednio przez 10 min i 5 min; po przemyciu skoniugować z Fmoc-Oic-OH. Rozpuścić 11,73 g Fmoc-Oic-OH, 4,9 g HOBt i 6,1 ml DIC w DCM (w celu rozpuszczenia można dodać niewielką ilość DMF), aktywować mieszaninę w łaźni lodowo-wodnej przez 7 minut, następnie przenieść do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godz. Punkt końcowy reakcji określa się metodą indantronową. Po zakończeniu odessać mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF, dwukrotnie usunąć zabezpieczenie Fmoc stosując 20% roztwór DBLK odpowiednio przez 10 min i 5 min, przemyć ponownie i przygotować do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

3：Sprzęganie z Fmoc-D-Cyt-OH

Rozpuścić 11,91 g Fmoc-D-Cit-OH, 5,00 g HOAt i 11,4 g HATU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,87 g DIPEA do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Zakończenie reakcji określa się metodą indiolową. Po reakcji usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF i usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK. Po przemyciu przygotować się do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

4：Sprzęganie z Fmoc-Ser(tBu)-OH

Rozpuścić 11,49 g Fmoc-Ser(tBu)-OH, 5,00 g HOAt i 6,1 ml DIC w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Po aktywacji w łaźni lodowo-wodnej przez 7 minut, przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny; Zakończenie reakcji określa się metodą indiolową. Po zakończeniu usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF, następnie usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK, a następnie przemyć przed przystąpieniem do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

5：Sprzęganie z Fmoc-Thi-OH

Rozpuścić 11,79 g Fmoc-Thi-OH, 5,00 g HOBt i 11,37 g HBTU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,87 g DIPEA do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i pozostawić na reakcję w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Zakończenie reakcji określa się metodą indiolową. Po reakcji usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF i usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK. Po przemyciu przygotować się do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

6：Sprzęganie z Fmoc-Gly-OH

Rozpuścić 8,91 g Fmoc-Gly-OH, 5,00 g HOBt i 9,63 g TBTU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,63 g TMP do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i pozostawić na reakcję w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Zakończenie reakcji określa się metodą indanonową. Po reakcji usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF i usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK. Po przemyciu przygotować się do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

7：Sprzęganie z  Fmoc-Hip(tBu)-OH

Rozpuścić 12,27 g Fmoc-Hip(tBu)–OH, 5,00 g HOAt i 9,66 g TATU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,63 g TMP do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Punkt końcowy reakcji określa się metodą indiolową. Po zakończeniu usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF i usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK. Po przemyciu przygotować się do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

8：Sprzęganie z Fmoc-Zawodowiec-OH

Rozpuścić 10,11 g Fmoc-Pro-OH, 5,00 g HOAt i 11,4 g HATU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,87 g DIPEA do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Punkt końcowy reakcji określa się metodą indiolową. Po zakończeniu usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF i usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% DBLK. Po przemyciu przygotować się do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

9：Sprzęganie z Fmoc-Arg(Pbf)-OH

Rozpuścić 19,44 g Fmoc-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt i 11,4 g HATU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,87 g DIPEA do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Zakończenie reakcji określa się metodą indiolową. Po reakcji usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF i usunąć zabezpieczenie Fmoc za pomocą 20% roztworu DBLK. Po przemyciu przygotować się do sprzęgania z kolejnym aminokwasem.

10：Sprzęganie z Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH

Rozpuścić 19,44 g Fmoc-D-Arg(Pbf)-OH, 5,00 g HOAt i 11,4 g HATU w DCM (z niewielką ilością DMF dodanego w celu rozpuszczenia). Dodać 3,87 g DIPEA do łaźni lodowo-wodnej i aktywować przez 7 minut; następnie przenieść mieszaninę do reaktora w fazie stałej i reagować w temperaturze pokojowej przez 1–2 godziny. Punkt końcowy reakcji określa się metodą indiolonową. Po zakończeniu usunąć mieszaninę reakcyjną, przemyć DMF, następnie użyć 20% DBLK w celu usunięcia zabezpieczenia Fmoc. Przemyć trzy razy DMF, trzy razy DCM i trzy razy metanolem w celu skurczu (odpowiednio przez 3 minuty, 5 minut i 8 minut), a następnie suszyć próżniowo w celu otrzymania żywicy z octanem peptydu etibantu.

Chromatogram HPLC octanu ikatybantu

11：Piroliza żywicy octanu ikatybantu

Przygotować 200 ml odczynnika do lizy zawierającego 190 ml kwasu trifluorooctowego, 6 ml triizopropylosilanu i 4 ml wody i wstępnie schłodzić w lodówce przez 30 minut. Dodać 20,0 g żywicy octanu peptydu etibant do okrągłodennej kolby o pojemności 500 ml, następnie dodać przygotowane 200 ml odczynnika do lizy do żywicy, mieszając w łaźni lodowej i pod przepływem azotu. Po 30 minutach reakcji usunąć łaźnię lodową i kontynuować reakcję w temperaturze pokojowej przez 2 godziny. Przesączyć żywicę i zebrać przesącz. Przemyć żywicę niewielką ilością kwasu trifluorooctowego, przesączyć i połączyć przesącze. Stopniowo dodawać przesącz do 20 l lodowatego eteru; tworzy się biały osad. Odwirować przy 3000 obr./min w celu zebrania osadu, przemyć pięć razy lodowatym eterem i wysuszyć pod zmniejszonym ciśnieniem, aby otrzymać 10,3 g surowego peptydu o czystości HPLC > 90%.