5-aminofluoresceina

5-aminofluoresceina (zwana także 5-AF lub fluoresceiną) jest szeroko stosowana jako odczynnik do znakowania fluorescencyjnego. Amina pierwszorzędowa 5-aminofluoresceiny może reagować z grupami karboksylowymi (poprzez aktywację EDC/NHS), aldehydami, ketonami lub aktywowanymi estrami (np. Estrami NHS), tworząc stabilne wiązania amidowe lub iminowe. Wykazuje maksimum wzbudzenia przy ~ 490 nm (λmax = 496 nm w buforze boranowym pH 8,5) i maksimum emisji przy ~ 515 nm, zapewniając jasnozielony sygnał o dobrej fotostabilności i przesunięciu Stokesa około 40 nm. Intensywność fluorescencji zależy od pH i wzrasta szczególnie w warunkach zasadowych (pH 8–9), co przypisuje się zmianom stanu protonowania grupy aminowej.

5-aminofluoresceina znalazła szerokie zastosowanie w badaniach biologicznych i medycznych – od znakowania białek i przeciwciał po konstruowanie systemów ukierunkowanego dostarczania leków i czujników fluorescencyjnych. 5-aminofluoresceina jest także kluczowym półproduktem w syntezie izotiocyjanianu fluoresceiny (FITC Izomer I), jednego z najpopularniejszych odczynników do znakowania białek.

Parametry produktu

Uwagi dotyczące przygotowania i przechowywania

5-AF zazwyczaj syntetyzuje się wychodząc z kwasu 4-nitroftalowego, po czym następuje redukcja (np. hydrazyną/FeOOH) i kondensacja z rezorcyną w kwasie metanosulfonowym. Surowy produkt jest mieszaniną 5- i 6-izomerów, które rozdziela się przez krystalizację. Nowoczesne metody (wspomagane mikrofalami lub enzymatyczne) mogą poprawić wydajność i zmniejszyć ilość produktów ubocznych. Końcowe oczyszczanie metodą HPLC zapewnia czystość ≥95%, a strukturę potwierdzono metodą NMR i MS.

Przechowywanie – Mieszanka jest wrażliwa na światło, powietrze i wilgoć. Przechowywać w zamkniętym pojemniku przepełnionym argonem w temperaturze 4°C w ciemności. W przypadku długotrwałego przechowywania (>6 miesięcy) zaleca się -20°C w postaci proszku (stabilny przez co najmniej 3 lata). Roztwory w DMSO można przechowywać w temperaturze -80°C przez 6 miesięcy lub w temperaturze -20°C przez 1 miesiąc. Unikaj powtarzających się cykli zamrażania i rozmrażania. Transport w temperaturze otoczenia jest dopuszczalny pod warunkiem ochrony przed światłem i wilgocią.

Często zadawane pytania (FAQ)

P1: Jaka jest różnica między 5-aminofluoresceiną (5-AF) a FITC? Jak wybrać?

Odp.: Obydwa są barwnikami zielono-fluorescencyjnymi, ale ich grupy reaktywne są różne.

● 5‑AF zawiera pierwszorzędową aminę (–NH₂). Wymaga aktywacji grupy karboksylowej obiektu docelowego (przy użyciu EDC/NHS) przed koniugacją. Najlepsze do znakowania cząsteczek, które zawierają już grupę karboksylową.

● FITC zawiera grupę izotiocyjanianową (–N=C=S), która reaguje bezpośrednio z aminami na obiekcie docelowym (np. resztami lizyny w białkach) – nie jest wymagana wcześniejsza aktywacja. FITC jest wygodniejszy do rutynowego znakowania białek.

● Wybierz 5‑AF, jeśli potrzebujesz specyficznej, zorientowanej koniugacji (np. poprzez uchwyt karboksylowy) lub jeśli planujesz syntezę niestandardowych pochodnych fluorescencyjnych. FITC jest ogólnie prostszy w przypadku bezpośredniego znakowania przeciwciał.

P2: Jakie są typowe warunki reakcji znakowania biomolekuł za pomocą 5-AF?

Odp.: Najpopularniejszą metodą jest sprzęganie amidowe: aktywuj grupy karboksylowe w cząsteczce docelowej za pomocą EDC i NHS (w buforze MES lub PBS, pH 5,5–6,5), następnie dodaj 5-AF i dostosuj pH do 7,5–8,5. Inkubować w temperaturze pokojowej lub 37°C przez 2–4 godziny. W przypadku celów zawierających aldehydy (np. glikoproteiny) należy zastosować aminowanie redukcyjne za pomocą cyjanoborowodorku sodu. Nieprzereagowany barwnik można usunąć poprzez odsalanie lub dializę. Dobrym punktem wyjścia jest stosunek molowy barwnika do białka wynoszący od 5:1 do 20:1.

Dlaczego Cosperpharm? – Nasze przewagi konkurencyjne

Skontaktuj się z nami

Niezależnie od tego, czy potrzebujesz małej próbki do eksperymentu pilotażowego, czy też ilości hurtowych do produkcji komercyjnej, Cosperpharm jest gotowy Ci pomóc. Skontaktuj się z nami już dziś, aby omówić Twoje wymagania dotyczące 5-aminofluoresceiny – i zobaczmy, jak możemy pomóc w rozwoju Twojego projektu.